TaqMan探针法qPCR是使用TaqMan荧光探针进行荧光检测的方法。其基本原理是PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。开始时，探针完整地结合在DNA任意一条单链上，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，检测不到荧光信号；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'核酸外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而发出荧光，切割的荧光分子数与PCR产物的数量成正比，因此，通过检测PCR反应体系中的荧光强度可以达到检测PCR产物扩增量的目的。

图. TaqMan水解探针作用机理图

 1   特异性高、定量准确

 2   实验耗时短

因探针法qPCR的高特异性，故无需再设置熔解曲线检测扩增产物的特异性如何，大大缩短了实验时间。

 3   兼容多重反应

不同波长的荧光报告基团可以标记不同的探针，因此可以在同一个反应体系中利用不同荧光标记的探针同时检测多个靶标，达到节省实验成本的目的。

 1   核酸定量分析

Taqman qPCR技术可对传染性疾病进行定量定性分析，包括病原微生物或病毒含量的检测，转基因动植物转基因拷贝数的检测，RNAi基因失活率的检测等。

 2   基因表达差异分析

 3   基因型/等位基因分析

单核苷酸多态性（SNPs）是由DNA序列中同一个位置上的碱基对的常见替换造成的个体DNA序列差异。SNP在人类基因组中数量较多，发生频率较高，检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义。

 4   药物开发研究

 5   无创产前检查

 6   肿瘤基因检测

尽管肿瘤发病的机理尚未清楚，但相关基因发生突变是致癌性转变的根本原因已被广泛接受。癌基因的表达增加和突变，在许多肿瘤早期就可以出现。

目前用此方法已进行过端粒酶hTERT基因、慢性粒细胞性白血病WT1基因、肿瘤ER基因、前列腺癌PSM基因、肿瘤相关的病毒基因等多种基因的表达检测。

 7   病原体检测

Taqman qPCR可以对多种病原体（如人类乳头瘤病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒及非洲猪瘟病毒）进行定量测定。该技术对病原体的检测解决了免疫学检测的“窗口期”问题，可判断疾病是否处于隐性或亚临床状态，适用于传染病早期的大规模确诊。

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒（ASFV）感染家猪或野猪引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病，其发病率和死亡率可达100%，严重危害着全球养猪业，造成难以估量的经济损失。

目前非洲猪瘟没有疫苗和有效的治疗手段，qPCR法是OIE推荐使用的非洲猪瘟常规诊断的重要工具，也是中国在现阶段非洲猪瘟流行情况下首选的检测技术。