产品简介

本支原体检测试剂盒是利用支原体中特有酶的活性设计而成，该酶可将支原体检测试剂中特有的底物分解同时将ADP转换成ATP，萤光素酶在ATP存在下催化萤光素氧化发出生物萤光，可通过化学发光仪(luminometer)进行测定，以反应待检样品是否存在支原体污染。整个检测过程操作简单，只需两个步骤，耗时约15 min。该方法灵敏度高，检测的是真正具有生物活性的支原体，所以检测结果比PCR方法更准确。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，支原体检测试剂A需避光保存；有效期12个月。

组成

操作步骤

1. 取适量（1 mL足够）培养3-6天的细胞上清，400 g离心3 min，以去除沉淀少量漂浮细胞或碎片，取上清立即检测，或者4℃保存在一周内检测，或者-80℃保存半年内检测；

2. 将所有检测试剂和检测样品均平衡至室温，最适宜的温度为20-25℃；

3. 在96孔检测板（非透明板，建议用专用96孔白板）中加入50 μL待检测样品、阴性对照（如无菌水或PBS）；

4. 加入50 μL支原体检测试剂A，轻柔混匀不要产生气泡，室温（20-25℃）避光放置5 min。然后用具有检测化学发光的酶标仪进行化学发光检测，计读数为A。（请根据仪器灵敏度适当调整相应的参数，每个孔的检测时间一般为0.25-1 s）；

5. 加入50 μL的支原体检测试剂B，轻柔混匀不要产生气泡，室温（20-25℃）避光放置10 min。然后用具有检测化学发光的酶标仪进行化学发光检测，计读数为B。（注：请严格按照加入支原体检测试剂B后10 min进行检测，不应提前或延后，否则会影响结果判断）；

6. 计算比值(Ratio)=读值B/读值A。

A. 如果B/A>1.1，说明细胞培养物中存在支原体污染；

B. 如果B/A<0.9，说明细胞培养物中没有支原体污染；

C. 如果B/A比值在0.9-1.1之间，建议继续培养细胞24-48 h后，再次检测确定是否存在支原体污染。如果B/A比值仍在0.9-1.1之间，则该细胞培养物没有支原体污染，为支原体阴性。

注意事项

1. 支原体检测试剂A中含有萤光素酶，反复冻融会逐渐使其失活，建议第一次解冻后应适当分装保存，分装容器需洁净无污染。

2. 检测时强烈建议使用白色或者黑色不透光96孔板，使用普通透明96孔板会使得相邻检测孔出现干扰。

3. 人体皮肤表面含有丰富的ATP，检测时请带好实验手套、口罩，其他耗材也应洁净、无污染，防止外源引入ATP污染。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！